Scientific and Educational Reports of the Faculty
of Science and Technology, Kochi University
Vol. 2 (2019), No. 3
八木華奈子，鈴木知彦
Kanako Yagi and Tomohiko Suzuki
〒780-8520 高知市曙町2-5-1 高知大学理工学部比較生化学研究室
要旨
多毛類Capitella sp. は全ゲノムが解読されており，その情報から少なくとも２種類（細胞質型とミトコンドリア型）のグアニジノキナーゼが存在していることが分かっている．その酵素活性は同定されていないが，アミノ酸配列からはロンブリシンキナーゼ（LK）の可能性が指摘された．今回の研究では，Capitellaのリコンビナント細胞質型酵素を用いて，その活性を明確にすることを目的にした．先ず，そのアミノ酸配列に基づき28本のDNAオリゴマーを設計し，オーバーラップ・エクステンション PCR法により遺伝子を全合成した．次に，この遺伝子をプラスミドに組み込み，大腸菌内でリコンビナント酵素を発現させた．酵素はHis-tagを用いて精製した．利用できる４種類のグアニジノ基質（クレアチン，アルギニン，グリコシアミン，タウロシアミン）を用いて酵素活性測定を行ったところ，タウロシアミンについてのみ強い活性を示した．次に，異なる64点の基質濃度において酵素活性を測定し，完全な酵素パラメータ（４種類の解離定数：KaTau, KiaTau, KaATP, KiaATP，及び kcat）を計算した．ATP存在下の酵素と基質タウロシアミンの親和性を示すパラメータ（KaTau ）は1.06 ± 0.125 mMであると決定され, この値は環形動物の他のタウロシアミンキナーゼ（TK）酵素の値（0.881-4.01 ｍM）と同等であり，Capitella酵素は主活性としてTK活性を持つことが分かった．また，タウロシアミンに対して副活性を示すEisenia LKでは，そのKaTauは15.3 mMであり，Capitella酵素（1.06 mM）よりも10倍以上親和性が低い．このことも，Capitella 酵素がLKではなくTKであることの傍証となる．今回の結果から，Capitella細胞質型酵素は，アミノ酸配列から予想されていたロンブリシンキナーゼではなく，タウロシアミンキナーゼであると結論される．
Received: January 23, 2019
Reviewed by anonymous referee(s), and accepted: January 26, 2019
Published: March 27, 2019
発行者：高知大学理工学部 〒780-8520 高知県高知市曙町二丁目5-1
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